关于人类的基因定位不能采用其他生物基因的定位方法，原因是：①不能直接用人体做试验，只能依据统计值进行分析，误差很大；②后代个体数少，性状的分离比难以确定。所以直到1967年，在常染色体仅定位了5个基因，确立了3个连锁群，而且没有一个连锁群与特定的染色体相联。后来人们开始利用体细胞培养和杂交技术进行基因定位，以后又结合了分子原位杂交技术，才使人类的基因定位得以迅速发展。
    
    一、系谱分析法
    
    在早期的人类遗传学研究中，确定基因属于哪个染色体一般都通过系谱分析法。由于女性有两个X染色体， 男性有一个X染色体和一个Y染色体，Y染色体上很少存在与X染色体上相应的等位基因（也就是说对于X连锁基因来讲，男子是半合体）。因此男性患者的X连锁致病基因必然来自母亲，以后又必定传给女儿。这种遗传方式称为交叉遗传。如果在一个家系中外祖父是某种疾病的患者，母亲的表现型是正常的，外孙中有半数是患者，就可以断定有关的隐性致病基因是在X染色体上。如红绿色盲基因便是在1911年通过系谱分析最早发现的人的性连锁基因。
    根据系谱分析，一般只能判断基因位于性染色体上还是在常染色体上，但却不能进一步判断它究竟位于哪一个常染色体上。
     
    二、体细胞杂交定位法
    
    1．体细胞杂交（somatic cell hybridization）
    体细胞杂交又称体细胞融合（somatic cell fusion），是指将两种基因型不同的体细胞融合成一个细胞的过程，这种融合后的细胞又称为杂种细胞，它兼有两种细胞的染色体。如果把人的体细胞和小鼠细胞的悬浮液混合在一起，再加上经紫外线处理的仙台病毒（Sandai virus，该病毒有几个附着点，能同时把两个细胞融合在一起），当两种细胞靠近后，细胞膜先融合，形成在一个细胞内同时含有两个细胞核的异核体（heterocryon）。接着异核细胞中的两个核再融合，成为杂种细胞。并继续分裂形成无性细胞系，即杂种细胞系（cell line of hybrid，图5-12）。
    2．杂种细胞的选择和特点
    为了分离出杂种细胞，常用HAT选择法。在此方法中，小鼠细胞株是胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK^－）；人的体细胞株是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT^－）。由于这两种酶相对应的嘧啶和嘌呤核苷酸的代谢影响都不大，故两种细胞都可在完全培养基中生长，若在含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）、胸腺嘧啶核苷（T）的HAT选择培养液中，上述亲本细胞都无法生存，只有融合后的杂种细胞才能生长，因此可有效地选择出杂种细胞。
    杂种细胞在最初几代中，包含两种亲本细胞的全部染色体，但在以后的繁殖过程中，人类的染色体逐渐丢失减少，最后仅剩下一至数条人类染色体，而小鼠的染色体却不丢失。这种杂种细胞系可稳定繁殖，形成不同类型的无性繁殖系。它们可直接用于基因定位。由于人和小鼠的大部分染色体的形态不尽相同，在显微镜下很易识别。这样就不难鉴定和检查杂种细胞染色体的组成和丢失情况。
    3．人类基因定位的方法
    （1）同线法
    在各种杂种细胞系中，除保留小鼠的全部染色体外，还有一至几条人类染色体，就可根据某一基因产物与某条染色体的同时存在或同时消失的现象，来判断人类某一基因是否位于该染色体上，这种方法称为同线法（表5-4）。
    
    表5-4   同线法进行人体基因定位
    
    
    

 
    表5-4指出，合成某种产物或酶的基因o和q在不同的杂种细胞系中同时出现，同时消失，表明二者是连锁的，而且这两个基因与2号染色体也是呈同线关系，说明基因o和q 位于2号染色体上。同理，基因p一定位于1号染色体上，基因r的所属关系尚待确定。
    （2）划区法
    利用染色体结均的变异，确定人类某个或某些基因在染色体的特定区域内，这种方法称为划区法（图5-13）。如用电离射线（如X射线，γ射线等）照射人类细胞株，使两条染色体之间发生易位（一条染色体的某一区段易接到另一条非同源染色体上的现象），如X色体和14号染色体间发生易位。然后，将已易位染色体的人类细胞与小鼠细胞杂交，获得各种无性细胞系，它们所带的人类染色体各不相同。随后再分析这些无性细胞系所产生的酶，就可进行基因定位。
    从图5-13中可看到，A细胞克隆含有两条人类染色体，有4种酶；B细胞克隆只有带易位片段的14号染色体，有3 种酶。而这3种酶的基因原来位于X染色体的长臂末端，易位给14号染色体后，B细胞克隆就有了这种酶，这说明3种酶的基因位于X染色体长臂末端。根据C细胞克隆的表现，同理说明Np基因位于14号染色体长臂末端。
    利用这些方法已定位了很多基因（图5-14）。